屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的研究

• 作者: 于波 侯雪新 刘凯 叶长芸 孙渭歌 徐建国 李振军 金东
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 屎肠球菌 TaqMan荧光定量PCR 标准曲线
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 551-555
• 页数: 5页
• 分类号: R378.1
• 字数: 3484字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.06.006

摘要

目的 建立屎肠球菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法.方法 根据屎肠球菌的ddl基因设计TaqMan荧光定量PCR特异的引物及探针,在多种常见致病菌及条件致病菌中检测其特异性;将目的 基因克隆到pMD18-T载体中建立标准曲线,检测方法的灵敏度和稳定性;使用腹水模拟标本验证方法的应用性.结果 在特异性评价中,除了阳性对照外其余菌株均未见特异性扩增曲线.建立屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,确定本方法对质粒标准品的检测下限为20copy/管.通过对1.0×107、1.0×105和1.0×1033个浓度质粒标准品的重复检测,确定屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的组内变异系数为1.90%~3.91%;组间变异系数为1.52%~1.69%.应用屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法对含菌量为1.6×100~1.6×108cfu/mL浓度梯度的腹水模拟标本进行检测,其检测灵敏度为1.6×102cfu/mL.结论 本研究建立了屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法.