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谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中的表达及酶转化生产β-丙氨酸
谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中的表达及酶转化生产β-丙氨酸
作者:
张梁
石贵阳
赵连真
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
L-天冬氨酸α-脱羧酶
β-丙氨酸
谷氨酸棒杆菌
表达
纯化
转化率
摘要:
[目的]克隆谷氨酸棒杆菌来源L-天冬氨酸α-脱羧酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并进行酶转化L-天冬氨酸合成p-丙氨酸的研究.[方法]PCR扩增谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶基因pand,构建表达载体pET24a(+)-Pand,转化宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌进行诱导表达,表达产物经DEAE离子交换层析和G-75分子筛层析纯化后进行酶学性质研究,然后进行酶转化实验,说明底物和产物对酶转化的影响.[结果]重组菌SDS-PAGE分析表明Pand表达量可达菌体总蛋白的50%以上,AccQ·Tag法检测酶活达到94.16 U/mL.该重组酶最造反应温度为55℃,在低于37℃时保持较好的稳定性,最适pH为6.0,在pH 4.0-7.0范围内有较好的稳定性.酶转化实验说明:底物L-天冬氨酸和产物β-丙氨酸对转化反应均有抑制作用;实验建立了较优的酶转化反应方式,在加酶量为每克天冬氨酸3 000 U时,以分批加入固体底物L-天冬氨酸的形式,使100 g/L底物转化率达到97.8%.[结论]重组L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中获得高效表达,研究了酶转化生产β-丙氨酸的影响因素,为其工业应用奠定了基础.
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谷氨酸脱羧酶
γ-氨基丁酸
最适pH
酶活性
L-天冬氨酸脱羧酶研究进展
L-天冬氨酸α-脱羧酶
L-天冬氨酸β-脱羧酶
β-丙氨酸
L(α)-丙氨酸
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篇名
谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶在大肠杆菌中的表达及酶转化生产β-丙氨酸
来源期刊
微生物学通报
学科
关键词
L-天冬氨酸α-脱羧酶
β-丙氨酸
谷氨酸棒杆菌
表达
纯化
转化率
年,卷(期)
2013,(12)
所属期刊栏目
工业微生物
研究方向
页码范围
2161-2170
页数
分类号
字数
语种
中文
DOI
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作者信息
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姓名
单位
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石贵阳
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张梁
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微生物学通报
主办单位:
中国科学院微生物研究所
中国微生物学会
出版周期:
月刊
ISSN:
0253-2654
CN:
11-1996/Q
开本:
16开
出版地:
北京朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所B401
邮发代号:
2-817
创刊时间:
1974
语种:
chi
出版文献量(篇)
6200
总下载数(次)
30
总被引数(次)
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