甘薯褪绿矮化病毒外壳蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 乔奇 张德胜 张振臣 王永江 王爽 田雨婷 秦艳红
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 甘薯褪绿矮化病毒 基因克隆 序列分析 外壳蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 85-87,120
• 页数: 4页
• 分类号: S436.32
• 字数: 2555字
• 语种: 中文

摘要

克隆甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)外壳蛋白(CP)基因,构建其原核表达载体,并在大肠杆菌中进行诱导表达.根据已报道的甘薯褪绿矮化病毒西非(WA)株系基因组核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR方法克隆了SPCSV四川分离物基因组RNA2上1 902 bp大小的片段.序列分析表明,该片段包括部分p60基因序列、完整的p8基因和CP基因(major CP)序列及部分mCP基因(minor CP)序列.CP基因由774个核苷酸组成,编码257个氨基酸残基,与已发表的SPCSV WA株系Can181-9分离物相比,其核苷酸和氨基酸序列一致性分别为99.48％和99.22％.将CP基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达的融合蛋白分子量约为38 kD,为SPCSV抗血清的制备及其血清学检测技术的建立奠定了基础.