大鼠Clara细胞分泌蛋白CC16基因的克隆和原核表达及纯化

• 作者: 刘志宏 庞敏 张彩苹 杜永成 王海龙 蒋毅 陈丽丽
• 来源期刊: 环境与健康杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大鼠Clara细胞分泌蛋白 原核表达 亲和纯化 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础与应用
• 页码范围: 290-294
• 分类号: R994.6
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆大鼠Clara细胞分泌蛋白(CC16)基因,原核表达并纯化重组的CC16蛋白,为进一步研究CC16蛋白的功能及对炎症性气道疾病的治疗作用奠定基础.方法 制备大鼠肺组织总RNA,根据大鼠CC16基因全长编码序列(GenBank登录号:NM_013051)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli DH5α),阳性菌落经PCR和双酶切鉴定并测序.将重组质粒pET30a(+)-rCC16转化至E coli Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,重组融合蛋白经Ni2+琼脂糖凝胶亲和纯化.分别以抗His标签抗体和山羊抗CC16抗体进行免疫印迹(Western blotting)分析并鉴定重组蛋白.结果 RT-PCR扩增产物约为290 bp.菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-rCC16构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量约16 kDa的可溶性重组蛋白.Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带His标签的重组融合蛋白,且能被山羊抗CC16抗体识别.结论 成功构建基因重组体pET30a(+)-rCC16,并制备出可溶性大鼠重组CC16蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜永成	山西医科大学第一医院呼吸科	130	665	13.0	20.0
3	张彩苹	山西医科大学第一医院呼吸科	18	114	3.0	10.0
4	王海龙	山西医科大学基础医学院	60	295	9.0	14.0
5	庞敏	山西医科大学第一医院呼吸科	31	116	6.0	9.0
6	蒋毅	山西医科大学第一医院呼吸科	13	45	3.0	6.0
7	刘志宏	山西医科大学第一医院呼吸科	20	56	4.0	6.0
10	陈丽丽	山西医科大学第一医院呼吸科	5	12	2.0	3.0