人源EFA6A蛋白Sec7结构域的克隆表达与纯化

• 作者: 唐雅珺 文汉 江娜 芮斌 谢长林 赵晨
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: Arf6 人EFA6A Sec7 表达 Ni-NTA柱 分子筛
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 81-85
• 语种: 中文

摘要

作为小GTP酶Arf6的鸟甘酸交换因子(GEF),人EFA6A蛋白主要包含PH和Sec7两个结构域,Sec7是行使GEF功能的核心区域.通过分析Jpred、Uniprot等生物信息学软件的预测结果,从全长1 024 aa中选取的重组Sec7结构域的边界为506-719,共214 aa.以人脑cDNA文库为模板,通过优化PCR程序成功扩增出Sec7基因,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后亚克隆至原核表达载体p28a中,成功构建p28-Sec7重组子,测序结果与NCBI中公布的序列100％吻合.将重组质粒p28-Sec7转化至BL21-Gold(DE3)宿主菌中,终浓度0.3 mmol/L IPTG、16℃、24h诱导表达,重组蛋白经过Ni柱和分子筛两步纯化.试验结果显示,重组Sec7成功表达,性质均一,纯度高于95％,表达量为70 mg/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文汉	安徽农业大学生命科学学院	38	414	11.0	20.0
2	赵晨	中国科学技术大学生命科学学院	10	75	6.0	8.0
3	芮斌	安徽农业大学生命科学学院	9	8	2.0	2.0
4	谢长林	安徽农业大学生命科学学院	4	16	1.0	4.0
5	江娜	安徽农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
6	唐雅珺	中国科学技术大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0