小麦SBEⅡa、SSⅡa基因片段的克隆及VIGS重组载体的构建

• 作者: 刘伟 南富波 李卫华 李淼淼
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦 SBEⅡa SSⅡa VIGS载体
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 页码范围: 1961-1966
• 页数: 6页
• 分类号: S512.1|S188
• 字数: 2761字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2013.11.001

摘要

[目的]克隆小麦SBEⅡa、SSⅡa基因部分序列并构建二者的VIGS重组载体,为在小麦上利用VIGS技术研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础.[方法]根据GenBank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)、SSⅡa(AF155217.2)基因序列分别设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa、SSⅡa基因的特异片段.然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接用SBEⅡa、SSⅡa基因片段分别将原载体中的PDS基因进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体.[结果]克隆的SBEⅡa和SSⅡa基因片段长分别是178 bp和171 bp.序列分析表明:SBEⅡa基因片段与小麦SBEⅡa(AF286319.1)序列同源性为100％;、SSⅡa基因片段与SSⅡa(AF155217.2)序列同源性也为100％;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体.[结论]构建的BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体将为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡa、SSⅡa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础.