新疆卡拉库尔羊Fas基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 李莲瑞 潘伊微 潘辉 贺艳艳 贾山岭
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 卡拉库尔羊 Fas基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 页码范围: 6-9
• 页数: 4页
• 分类号: S436.68+4
• 字数: 3946字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank的羊Fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物,将EcoR Ⅰ和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端,同时加上保护性碱基.利用RT-PCR技术,从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段.将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接,利用双酶切反应与菌液PCR对阳性重组克隆进行鉴定筛选,然后进行序列测定.使用原核表达载体pET28a来完成Fas的定向克隆,成功构建重组融合表达质粒pET-28a-Fas,然后将质粒转化至E.coli BL21感受态,设置不同IPTG浓度和诱导温度,选择最佳的表达条件,然后初步纯化重组融合蛋白.结果表明,在pET28a表达载体中,Fas基因的插入方向和读码框均正确;同时Fas基因也完成在E.coli BL21融合表达的日的,融合蛋白分子质量为39.7 ku.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺艳艳	塔里木大学生命科学学院	13	32	3.0	5.0
2	潘辉	塔里木大学动物科学学院	14	34	3.0	5.0
3	贾山岭	塔里木大学生命科学学院	7	9	1.0	3.0