HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化

• 作者: 丁森 刘利 徐涛 杜翠容 涂漫语 罗佳 胡仁建 蔡家利
• 来源期刊: 重庆医学
• 关键词: HPV18 HPV18E7基因 HeLa细胞株 自诱导培养基
• 年，卷（期）: 2013,（30）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3647-3649
• 页数: 3页
• 字数: 3178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2013.30.022

摘要

目的：构建HPV18E7基因重组质粒，并探索其在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法以提取的 HeLa细胞株中的DNA为模板PCR扩增 HPV18E7基因；将HPV18E7基因与载体pET-32a（＋）连接为重组质粒pET-32a（＋）-HPV18E7；将该重组质粒转入大肠杆菌BL21-DE3-pLysS细胞中，探索优化表达的条件，以获得大量HPV18E7致癌蛋白。结果 PCR扩增的目标基因大小序列与HeLa细胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培养基，IPTG和乳糖诱导表达显示不同浓度、不同温度、不同诱导起始量等表达量均不高，尝试用ZYM-5052自动诱导培养基诱导，HPV18E7融合蛋白的表达量远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导表达的表达量。结论测序正确的 HPV18E7重组质粒在自动诱导培养基ZYM-5052中获得远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导表达的HPV18E7融合蛋白。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡家利	重庆理工大学药学与生物工程学院	37	96	5.0	6.0
2	胡仁建	重庆理工大学药学与生物工程学院	10	23	3.0	4.0
3	刘利	重庆理工大学药学与生物工程学院	9	5	1.0	1.0
4	涂漫语	重庆理工大学药学与生物工程学院	1	1	1.0	1.0
5	徐涛	重庆理工大学药学与生物工程学院	2	2	1.0	1.0
6	杜翠容	重庆理工大学药学与生物工程学院	1	1	1.0	1.0
7	罗佳	重庆理工大学药学与生物工程学院	1	1	1.0	1.0
8	丁森	南京大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0