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摘要:
RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法,为了快捷高效地构建水稻(简易RNAi表达载体,本研究采用简易RNAi构建法,设计3'末端9个碱基互补的正向和反向寡聚核苷酸引物,通过聚合酶延伸成为具有反向重复序列的小干扰片段.以pCAMBIA 1301-Gt 13a为表达载体,将小干扰片段与表达载体经过一次双酶切与连接得到RNAi载体.用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法得到水稻(Oryza sativa ssp.japonica)转基因株系后,用叶片GUS染色和qRT-PCR法,对RNAi转基因水稻和野生型日本晴叶片GUS组织活性和籽粒中目的基因表达量进行检测.水稻叶片GUS染色结果显示,有10株转基因水稻叶片切口处呈现蓝色,而野生型无显色反应,说明RNAi载体T-DNA区域的基因已整合到水稻基因组上,并表达.在mRNA水平上转基因水稻籽粒中目的基因相对表达量降低至18%~55%,差异极显著(P<0.01),表明整合在水稻基因组上的小干扰片段能降低目的基因的表达水平.籽粒灌浆成熟后对10株转基因水稻及野生型日本晴籽粒的单粒重、粒长、粒宽和厚度分别进行测量.与野生型日本晴相比,转基因水稻籽粒单粒重发生显著性降低(P<0.05),籽粒变小,长和宽都发生显著性变化(P<0.05),说明简易RNAi载体对水稻目的基因的表达起到很好的沉默效果.本研究不仅为利用简易RNAi构建法研究水稻功能提供了依据,也为快捷高效地研究水稻基因功能提供了基础资料.
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根系发育
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文献信息
篇名 水稻简易RNAi载体构建及沉默效果鉴定
来源期刊 农业生物技术学报 学科
关键词 水稻 RNAi载体构建 沉默效果
年,卷(期) 2014,(7) 所属期刊栏目 研究论文与报告
研究方向 页码范围 832-840
页数 9页 分类号
字数 6455字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.07.005
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水稻
RNAi载体构建
沉默效果
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农业生物技术学报
月刊
1674-7968
11-3342/S
大16开
北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室
2-367
1993
chi
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