测序级胰蛋白酶的制备工艺与质量检测

• 作者: 卢大儒 喻峰 陈薇
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰蛋白酶 还原甲基化 TPCK修饰 高效液相色谱 反相色谱纯化 质谱分析
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 76-81
• 页数: 6页
• 分类号: Q502
• 字数: 4969字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.01.019

摘要

目的：制备高纯度、酶解效率高、酶切位点专一的测序级胰蛋白酶，应用于蛋白组学研究的蛋白质鉴定与分析中。方法：取实验室自制的猪胰蛋白酶粗酶，经硼氢化钠、甲醛还原甲基化修饰抑制胰蛋白酶自水解，采用高效液相色谱仪15RPC反相柱纯化，收集对应的甲基化胰蛋白酶峰组分，冷冻干燥；甲基化修饰的胰蛋白酶进一步经甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮（TPCK）修饰，以抑制糜蛋白酶等非特异性酶切活性，并经反相色谱柱再纯化，获得终产物即质谱测序级胰蛋白酶；自制的测序级胰蛋白酶经SDS-PAGE、HPLC反相色谱分析、酶比活力测定，并应用于胶内蛋白质酶切质谱鉴定氨基酸序列等，检测其纯度、酶水解效率及酶切位点特异性。结果：自制甲基化TPCK修饰的测序级胰蛋白酶纯度大于95%，酶比活力为200 U/mgP（TAME）以上，质谱分析酶切特异性好；且酶的制备工艺流程稳定，可应用于测序级胰蛋白酶产品的生产与开发中。结论：制备的测序级胰蛋白酶纯度高、酶解效率优、酶切特异性强，可广泛应用于实验室中蛋白质和肽段测序鉴定、HPLC肽段谱图分析等蛋白组学研究分析中。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢大儒	复旦大学生命科学学院	137	982	17.0	25.0
2	陈薇	中国科学院上海生命科学学院生化细胞研究所蛋白质组研究分析中心	13	137	7.0	11.0
3	喻峰	复旦大学生命科学学院	1	8	1.0	1.0