靶向FTL基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 柳彩芝 樊玉梅 段相林 王胜南 蔡琳琳 黄永茂
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: FTL基因 RNA干扰 shRNA 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-12
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.05.0102-5

摘要

目的:为了构建铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的短发夹小干扰RNA表达载体,并提供进一步研究FTL功能的平台.方法:针对小鼠FTL基因的特异性位点设计并合成特异性长度约65bp的短发夹状小干涉RNA(shRNA)寡核苷酸序列,退火形成双链后将其插入真核表达载体pRNA-U6.1/neo的限制性内切酶HindⅢ和BamH Ⅰ之间中,构建成FTL基因的干扰载体(FTLshRNA).经测序鉴定正确后,用lipofectamineTM 2000将FTL shRNA及其对照空载体pRNA-U6.1/neo分别转染到小鼠腹腔单核巨噬细胞(RAW264.7)中,提取蛋白后利用Western blot技术检测细胞中FTL蛋白的表达.结果:得到与预期目的片段大小相似的重组载体,测序结果显示所构建的小鼠FTL shRNA质粒序列正确.细胞内的FTL表达被FTL shRNA成功干扰,效率高达80％.结论:实验成功构建了小鼠FTL基因的短发夹小RNA干扰表达载体FTL shRNA.