犬瘟热病毒H蛋白基因重组腺病毒的构建及免疫效果评估

• 作者: 刘国强 刘晔 宋菲菲 张乐萃 张守峰 扈荣良 袁颖烁
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬瘟热病毒 H基因 腺病毒 免疫效果
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 64-70
• 分类号: Q939.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140110

摘要

研究选取犬瘟热病毒H蛋白基因为目的基因,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶切、连接等方法构建出重组人5型腺病毒穿梭质粒和骨架质粒,两者共转染293AD细胞并包装出重组腺病毒.通过电镜负染、酶切鉴定、Western blot及一步生长曲线测定等方法进行病毒的生物学特性鉴定,证明犬瘟热病毒H蛋白基因重组腺病毒构建正确.犬分别肌肉接种CDV疫苗毒和重组腺病毒,并检测免疫后第14,28,42,56,70,84d时犬血清中抗CDV中和抗体的变化情况.结果显示,犬免疫重组腺病毒后体内产生的抗CDV平均中和抗体水平高于对照组,滴度最高达2-8.研究表明,正确构建的重组腺病毒具有良好的免疫原性,诱导产生的抗犬瘟热病毒中和抗体达到犬最低免疫保护水平,为进一步研发犬瘟热病毒活载体疫苗提供理论依据.