罗非鱼无乳链球菌LrrG-Sip融合基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘志刚 卢迈新 可小丽 曹建萌 曾祖聪 朱华平 高风英
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 罗非鱼 无乳链球菌 LrrG Sip 融合基因 原核表达载体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 17-23
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 4001字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.003

摘要

LrrG和表面免疫原性蛋白（ Sip）是无乳链球菌（ Streptococcus agalactiae）的2种表面蛋白，具有良好的免疫原性。为获得罗非鱼无乳链球菌表面蛋白LrrG和Sip蛋白的融合蛋白，该试验采用基因拼接技术中的双酶切法分2步逐个将Sip和LrrG基因插入pCold Ⅱ载体中，构建原核表达载体pCold Ⅱ-LrrG-Sip。将成功构建的融合基因原核表达载体转化感受态细胞BL21（DE3），进行诱导表达条件的优化。结果显示，15℃、IPTG 0.5 mmol·L-1诱导9 h，目的蛋白呈可溶状态的表达量最高。Western Blot检测结果显示LrrG-Sip融合蛋白大小与预测一致（162 kDa），说明成功构建了融合基因，为罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗的研制奠定了基础。