利用内源荧光筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂

• 作者: 唐淳 张纬萍 董旭 蒋文学 韩雪 黄鹏
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 光谱法,荧光 转移酶类 NAD 酶抑制剂 药物评价,临床前
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 319-326
• 页数: 8页
• 分类号: R96
• 字数: 5041字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2014.05.010

摘要

目的:建立内源荧光检测筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)抑制剂的方法.方法:以1,4-二马来酰亚胺基丁烷(BMB)交联G355 C/D393C双突变NAMPT,封堵其催化活性中心,以野生型及交联型NAMPT蛋白的自发荧光变化(280 nm激发波长,333 nm发射波长)检测化合物与蛋白的结合,以核磁共振方法体外检测化合物对NAMPT催化作用的影响,以MTT方法检测化合物对人肺癌A549细胞活性的影响.结果:FK866在0.1～1.0 μmol/L浓度范围内能浓度依赖地抑制野生型NAMPT自发荧光,但对交联型NAMPT的自发荧光没有影响.迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对两种蛋白自发荧光的抑制率无显著差异.FK866能够显著抑制NAMPT的催化作用,但迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对NAMPT的催化作用无抑制作用.FK866显著抑制A549细胞的活性,而迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对A549细胞活性无抑制作用.结论:基于野生型和交联型NAMPT蛋白的内源性荧光检测法可以筛选与NAMPT蛋白结合的化合物,并分析化合物是否结合在NAMPT的催化活性部位,迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸可结合在NAMPT催化活性位点以外的部位.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄鹏	浙江大学医学院药理学系	13	52	4.0	7.0
2	张纬萍	浙江大学医学院药理学系	43	249	10.0	14.0
3	董旭	中国科学院武汉数学与物理研究所	4	8	1.0	2.0
4	唐淳	中国科学院武汉数学与物理研究所	4	0	0.0	0.0
5	韩雪	浙江大学医学院药理学系	3	2	1.0	1.0
9	蒋文学	中国科学院武汉数学与物理研究所	1	0	0.0	0.0