CYP2E1基因过表达细胞株的建立及鉴定

• 作者: 吴德生 周丽 徐新云 毛侃琅 毛吉炎 秦逍云 谢杏 谭琴
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝细胞 CYP2E1基因 慢病毒载体 转染 过表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 127-130
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3379字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.010

摘要

目的：应用分子克隆技术，构建CYP2E1基因过表达载体，转染L02肝细胞，建立CYP2E1过表达细胞株并进行鉴定，为深入研究环境和职业毒物的毒作用机制提供模型细胞。方法：根据GenBank提供的基因cDNA序列设计引物，PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒过表达载体pLVX-acGFP1-C1中，将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染，收集病毒上清，感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到转染CYP2E1基因的L02细胞，通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。结果：测序证明重组慢病毒过表达载体CYP2E1基因序列与GenBank提供的CYP2E1序列一致，荧光定量PCR检测转染CYP2E1基因的L02细胞比正常肝细胞CYP2E1 mRNA表达提高273倍，Western blot实验显示转染CYP2E1基因的L02细胞CYP2E1蛋白表达水平比正常肝细胞提高3.2倍。结论：成功构建了CYP2E1基因过表达细胞株，可应用于环境毒物和职业毒物的分子机制研究。CYP2E1