2A肽介导猪PID1与CuZnSOD双基因真核共表达载体的构建与细胞表达

• 作者: 张哲 徐正刚 房国锋 曾勇庆 李同明 杨云 楚青惠 王守栋 陈伟
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 2A肽 PID1 CuZnSOD 真核共表达载体 PK15细胞
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q343.3|Q786
• 字数: 3718字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2016.06.001

摘要

构建PID1基因与CuZnSOD基因的真核共表达载体，在PK15细胞中鉴定基因的表达。 PCR扩增的PID1与CuZnSOD两基因分别经双酶切后定向插入pIRES2-AcGFP1空载体，构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体并进行测序与酶切鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒转染至PK15细胞，细胞内荧光显微镜下观察其荧光的表达，RT-PCR、Western blot技术分别检测PID1基因与CuZnSOD基因mRNA和蛋白表达情况。重组克隆载体插入目的片段序列与PID1基因与CuZnSOD基因序列完全一致。 PIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体测序、酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微镜下观察转染后的PK15细胞出现绿色荧光。 RT-PCR检测结果显示，转染细胞中PID1基因与CuZnSOD基因表达量明显高于对照组（ P＜0.05）。 Western blot 检测结果表明pIRES2-CuZnSOD-PID1真核双表达载体稳定有效表达。成功构建pIRES2-CuZnSOD-PID1真核共表达载体，且双基因在真核细胞独立稳定表达，为转基因猪等育种新材料的制备奠定基础。