基于异源策略的黄曲霉毒素B1酶联免疫(ELISA)分析方法的建立

• 作者: 印南日 吴慧 周海燕 张奇 张文 李培武 李敏 王恒玲 马飞
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 黄曲霉毒素B1 人工抗原 合成鉴定 ELISA 异源策略
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 测试与加工
• 页码范围: 802-807
• 页数: 6页
• 分类号: S379.7
• 字数: 4479字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7505/j.issn.1007-9084.2014.06.017

摘要

为提高黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)酶联免疫分析灵敏度,建立了基于异源策略的间接竞争酶联免疫分析(IC-ELISA)方法.首先采用黄曲霉毒素B1与羟基乙酸(glycolic acid,GA)进行衍生化反应,生成缩醛(AFB2-GA),即AFB1半抗原,质谱鉴定结果为ESI-MS:388.07[M+H]+,表明半抗原合成成功.然后采用活泼酯法,将AFB1半抗原羧基与牛血清白蛋白(BSA)的氨基经脱水反应实现化学共价偶联,得到AFB1人工抗原AFB2-GA-BSA.紫外扫描结果表明人工抗原AFB1特征吸收峰与BSA和AFB1的特征吸收峰有明显差异,BSA与黄曲霉毒素B1成功偶联,摩尔结合比分别为8.45∶1.最后将黄曲霉毒素B1人工抗原AFB2-GA-BSA作为包被原,利用黄曲霉毒素B1高特异性3G1抗体,建立了基于异源策略的IC-ELISA方法.利用该方法测定了3G1抗体的灵敏度,检测灵敏度达到0.3ng/mL,比同源ELISA方法检测灵敏度(1.6ng/mL)提高了81.25％,并将方法应用于花生中黄曲霉毒素的实际检测.测定结果与高效液相色谱法结果进行比对,结果符合曲线y=1.044 4x+0.090 2,R2 =0.975 1,说明该方法能满足花生中黄曲霉毒素快速筛查的测定准确度的要求.