烟草4CL与虎杖STS融合基因的构建、表达及融合蛋白纯化

• 作者: 刘文彬 杨亚东 杨明峰 王有年 郭辉力 马兰青
• 来源期刊: 北京农学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 白藜芦醇 融合基因 双功能酶 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4037字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2014.0051

摘要

白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化等众多药理作用.4-香豆酰辅酶A连接酶(4-Coumarate-CoA ligase,4CL)和芪合酶(Stilbene synthase,STS)是其生物合成的关键酶和限速酶.本研究利用悬挂PCR (Overlap PCR)技术将白藜芦醇生物合成的最后两个关键酶4CL和STS的基因融合,构建原核表达pET30a-Nt4CL∷PcPKS5重组质粒,原核表达Nt4CL∷PcPKS5融合酶蛋白.预测其共编码945个氨基酸,含15个氨基酸的过渡氨基酸链(Linker),编码蛋白质分子量(Mr)为102.8 kDa,等电点(pI)为5.69.原核表达筛选结果表明:温度为25℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导起始OD600值在0.4～0.6之间,诱导4h时目标蛋白的表达量最高.细胞破碎后,经Ni2+亲和柱纯化、PD-10柱脱盐后可纯化得到融合蛋白.本研究为通过分子生物学途径合成白藜芦醇奠定基础.