MITF基因突变致Ⅱ型Waardenburg综合征发病的实验研究

• 作者: 冯永 张华 李家大 梅凌云 罗洪金 贺楚峰 陈红胜
• 来源期刊: 听力学及言语疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Waardenburg综合征 小眼球畸形相关转录因子 基因突变 体外实验
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 378-385
• 页数: 8页
• 分类号: R764.43
• 字数: 7215字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7299.2014.04.011

摘要

目的 通过体外实验研究小眼球畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)突变基因功能,初步探讨其致Ⅱ型Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome,WS)发病的分子机制.方法 以野生型MITF基因真核细胞表达质粒pCMV-MITF-Flag为模板分别构建二个致Ⅱ型WS的MITF基因新发突变R217I和T192fsX18的真核细胞表达质粒.野生MITF和突变R217I和T192fsX18表达质粒瞬时转染黑色素瘤细胞或小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞),应用Western blot和细胞免疫荧光分别检测其表达和亚细胞定位;应用荧光素酶活性检测系统通过对酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)报告基因活性检测观察野生/突变MITF蛋白对其靶基因TYR转录活性的调控作用,以及二个突变蛋白对野生MITF蛋白功能的影响;应用生物素标记的含E box基序(CATGTG)的DNA寡核苷酸链探针分别沉淀MITF、R217I及T192fsX18蛋白,检测野生/突变MITF蛋白与靶基因TYR启动子的结合力.结果 成功构建了突变型R217I、T192fsX18真核细胞重组表达质粒pCMV-R217I-Flag和pCMV-T192fsX18-Flag,MITF蛋白与R217I、T192fsX18突变蛋白在黑色素瘤细胞中正确表达,进一步验证了重组质粒构建的正确性.突变R217I蛋白与野生MITF蛋白一样仅在细胞核中分布,而T192fsX18蛋白则出现异常亚细胞定位,仅在细胞质中分布.尽管R217I蛋白仍残余部分功能可增加TYR启动子转录活性,但与野生MITF蛋白相比,二者差异有显著统计学意义(P＜0.01),而T192fsX18蛋白则完全失去调控TYR启动子转录活性作用(P＜0.01);二者均未对野生MITF蛋白功能产生显性负效应(P＞0.05).突变R217I蛋白与野生MITF蛋白均可与TYR启动子特异DNA序列E-box结合,而突变T192fs X18蛋白则不能与之结合.结论 R217I和T192fsX18突变蛋白通过影响靶基因TYR转录活性,使其表达下调、黑色素合成减少,以单倍体剂量不足效应致Ⅱ型WS.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张华	新疆医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科	246	1096	15.0	21.0
2	冯永	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	102	545	12.0	16.0
3	梅凌云	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	43	225	9.0	13.0
4	贺楚峰	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	40	202	9.0	12.0
5	陈红胜	中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科	18	70	5.0	7.0
6	李家大	中南大学医学遗传学国家重点实验室	11	12	2.0	3.0
7	罗洪金	中南大学医学遗传学国家重点实验室	1	3	1.0	1.0