人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段噬菌体文库的初建

• 作者: 刘明华 向强 张雷 曹宇亮 田君 陈翔宇
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 尖吻蝮蛇 蛇毒蛋白 噬菌体 抗体文库
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 19-22,27
• 分类号: R595.8|Q789
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段(scFv)噬菌体文库.方法 采用Trizol试剂提取尖吻蝮蛇咬伤后恢复期患者的外周血淋巴细胞的总RNA,用Oligotex@mRNA Mini Kits纯化获得总mRNA,逆转录合成总cDNA,针对人抗体轻链和重链可变区基因设计一系列特异性引物,以合成的总cDNA为模板,扩增得到抗体轻链和重链可变区基因库,再通过重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)将轻链和重链拼接得到scFv文库;将scFv基因双酶切后,插入T7噬菌体骨架进行包装,以尖吻蝮蛇蛇毒蛋白抗原进行4轮淘选,建立蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,采用噬斑法检测scFv噬菌体文库滴度并进行PCR及测序鉴定.结果 成功地将轻链和重链可变区基因库混合拼接得到scFv文库;经4轮淘选,蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库滴度为6.0×1014PFU/ml,抗体基因在噬菌体中表达的阳性率达50％以上,表达的scFv片段均为轻链和重链的杂合体,可较好的重现可变区的多样性.结论 已成功构建了人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,为下一步噬菌体文库的克隆构建和筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向强	第三军医大学西南医院急救部	35	143	7.0	10.0
2	张雷	第三军医大学西南医院急救部	42	270	11.0	14.0
3	刘明华	第三军医大学西南医院急救部	107	1140	15.0	30.0
4	田君	第三军医大学西南医院急救部	15	54	3.0	7.0
5	陈翔宇	第三军医大学西南医院急救部	18	104	6.0	9.0
6	曹宇亮	第三军医大学西南医院急救部	2	3	1.0	1.0