产琥珀酸丝状杆菌1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

• 作者: 张慧玲 杨玉霞 汪艳 陈勇
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 产琥珀酸丝状杆菌 1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因 毕赤酵母 基因表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 123-130
• 分类号: S852.23
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2014.04.018

摘要

为实现瘤胃细菌产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因(FsGLU)的高效表达,开发新的饲用β-葡聚糖酶资源,根据毕赤酵母对密码子的偏爱性、G+C含量等特点,对FsGLU基因进行密码子优化,然后合成优化后的1,3-1,4-β-葡聚糖酶基因(FsGLUm),转化毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达并对重组FsGLUm的酶学特性、底物特异性和对消化酶的耐受性进行了研究.结果表明:摇瓶水平条件下,以甲醇诱导表达48 h时,重组FsGLUm酶活性提高25.1％(P＜0.05).在10 L发酵罐中诱导96 h后,重组FsGLUm的活性为6 424 U· mL-1,菌体湿质量和干质量达到274.6和123.6 g·L-1.酶学特性分析表明:纯化后的重组FsGLUm最适反应温度为37℃,最适反应pH值为5.0,比活性为10 397U·mg-1.在温度低于37℃、pH 5.0 ～6.5时该酶具有较好的稳定性.底物特异性分析表明:重组FsGLUm可水解大麦β-葡聚糖和地衣多糖,不降解燕麦木聚糖、桦木木聚糖和羧甲基纤维素钠.在胃蛋白酶和胰蛋白酶共同作用60 min后,仍保留了50.5％的酶活性.结论:FsGLU基因在毕赤酵母GS115中实现了高效表达,重组FsGLUm作为饲用酶制剂具有潜在的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈勇	新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室	70	383	12.0	14.0
2	张慧玲	新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室	13	48	5.0	6.0
3	杨玉霞	新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室	5	20	3.0	4.0
4	汪艳	新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室	6	24	3.0	4.0