延边白鹅IFN-α基因的原核表达及其表达产物生物学活性的研究

• 作者: 于清洋 宋铭忻 张丽媛 张颖 彭永刚 陈海迪 高旭 鲁承
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 延边白鹅 α干扰素 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 527-531
• 页数: 5页
• 分类号: S852.42
• 语种: 中文

摘要

以本实验室构建的鹩pMD18-T-IFN-α载体为基础,利用PCR技术扩增得到鹅α干扰素(IFN-α)DNA,经BamH I+Sal I双酶切,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a上.将构建的重组质粒pET-30a-IFN-α转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定;用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体并进行鉴定.结果显示,PCR扩增出的鹅α干扰素基因全长576 bp;成功构建了原核表达载体pET-30a-IFN-a并得到表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测,该蛋白的分子质量约为29 ku,以纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,血清效价为1∶32.本试验为研究鹅IFN-α的作用机理,开发有效防治鹅疾病的新型制剂奠定了基础.