IFN-λ真核表达载体的建立及其表达产物的生物学功能评估

• 作者: 刘文宣 周慧敏 房桂英 李全海 李竞 李雅琪 胡洁 齐义新
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: IFN-λ 真核表达 抗增殖 凋亡 抗病毒
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 816-820
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.11.002

摘要

目的：构建 IFN-λ真核表达体系，检测 IFN-λ基因在真核细胞中的表达，评估真核细胞表达 IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从 poly I∶C 刺激的 HuH-7细胞 mRNA 中克隆 IFN-λ1／2基因全长，并进行 DNA 基因测序；构建 pcDNA3-IFN-λ1／2质粒，酶切鉴定，并将其转染 COS-7细胞，应用 Western 印迹检测 IFN-λ1／2在 COS-7细胞中的表达。COS-7细胞表达的 IFN-λ1／2作用于人食管癌 YES5和 T．Tn 细胞株，CCK-8法检测癌细胞增殖， Western 印迹检测凋亡蛋白 caspase-3的活化，实时荧光定量 PCR 检测 ISG15及 MxA 抗病毒基因表达。结果经PCR、DNA 测序和酶切鉴定，克隆的 IFN-λ1／2基因与 GenBank 公布的序列一致，IFN-λ1／2基因序列正确构建入pcDNA3载体中；在 pcDNA3-IFN-λ1／2转染的 COS-7细胞中检测到 IFN-λ1／2蛋白表达；其表达产物可诱导食管癌细胞增殖抑制、活化凋亡蛋白 caspase-3，并且上调抗病毒 ISG15及 MxA 基因。结论建立了 IFN-λ真核表达体系，即通过 pcDNA3-IFN-λ1／2转染 COS-7细胞实现了 IFN-λ表达；经此体系表达的 IFN-λ具有抗增殖、诱导凋亡及上调抗病毒基因表达的生物学作用；此体系的建立为 IFN-λ的生物学功能研究和临床应用奠定了基础。