乙酸钙不动杆菌磷脂酶C在大肠杆菌中重组表达、纯化及酶学性质分析

• 作者: 丁重阳 张梁 汪艳红 石贵阳 顾正华
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 乙酸钙不动杆菌 磷脂酶C 纯化 重组表达
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1221-1227
• 分类号: Q936
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.10.015

摘要

[目的]构建乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus) ATCC17902磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组大肠杆菌菌株、纯化重组酶并进行酶学性质分析比较.[方法]以A.calcoaceticus ATCC17902基因组DNA为模板,PCR扩增得到两段磷脂酶C基因(PLC1、PLC2),构建重组大肠杆菌表达质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,实现PLC1、PLC2基因的表达.IPTG诱导表达后,经镍柱亲和层析纯化重组蛋白.[结果]成功构建两株产磷脂酶C的重组大肠杆菌并纯化,样品经SDS-PAGE分析在80 kDa附近均出现显著的特异性条带.NPPC法测得PLC1、PLC2酶活分别为31160 ±418 U/mg、13640±354 U/mg,最适反应温度分别为65、50℃,最适pH值分别为8、7.5.在低于30℃时,pH值7-8时,PLC1、PLC2重组酶较稳定,40℃处理30min,PLC1酶活稳定而PLC2残余酶活低于25％.Mg2+、Ca2增强PLC1、PLC2的活性,Zn2+增强PLC1酶活性却抑制PLC2酶活.底物特异性分析表明PLC1、PLC2均水解磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI),对其他种类磷脂不能水解或水解程度很低.[结论]本文首次实现了A.calcoaceticus ATCC17902来源的磷脂酶C的重组表达与功能验证,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了一定的借鉴意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张梁		7	33	4.0	5.0
2	丁重阳		4	26	3.0	4.0
3	顾正华		2	14	2.0	2.0
4	汪艳红		1	2	1.0	1.0