大肠杆菌重组表达磷脂酶C的发酵工艺优化

• 作者: 丁重阳 张梁 石贵阳 赵金星 顾正华
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 磷脂酶C 重组大肠杆菌 发酵过程 工艺优化
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 143-149
• 页数: 7页
• 分类号: Q936
• 字数: 7270字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201309030

摘要

以重组表达铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 41磷脂酶C的大肠杆菌BL21 (DE3)/pET28a-plcH为考察菌株,从TB培养基出发,在优化缓冲液、碳源种类和质量浓度的基础上,比较异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、乳糖诱导重组酶表达的效果,并考察甘氨酸对重组酶发酵的影响；最后,在7L发酵罐规模对上述优化工艺进行放大验证.结果表明:重组大肠杆菌最适培养基组成为:蛋白胨12g/L、酵母膏24g/L、甘油5g/L,0.25mol/L Tris-HCl(pH7.2～7.4)缓冲液配制；在此培养基中添加卡那霉素(Kana)的质量浓度至0.15mg/mL,37℃、200r/min培养6h后,添加乳糖至终质量浓度为5g/L,在25℃、150r/min诱导培养20 h,重组磷脂酶C活力可达到(1422.42±37.17)U/mL; 7L发酵罐实验中,总酶活力达到(11583.35±70.21)U/mL,比摇瓶条件下提高了7倍左右,其中胞内酶活力最高为(10957.97±58.03)U/mL,胞外酶活力最高为(645.27±13.87)U/mL.