Anxa5真核表达质粒构建及其对小鼠肝癌Hca-P细胞增殖影响观察

• 作者: 刘淑清 唐建武 孙明忠 彭博雅 李妲 田余祥
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Anxa5 淋巴转移 基因转染 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 前沿报道/论著
• 页码范围: 91-94,99
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5269.2014.02.003

摘要

目的:构建pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5真核表达质粒,获得膜联蛋白A5 (Annexin A5,Anxa5)表达稳定上调的小鼠肝癌Hca-P细胞株,探究Anxa5上调对Hca-P增殖的影响.方法:利用RT-PCR扩增小鼠全长Anxa5编码序列,将其克隆到pcDNA3.1-V5/HisB载体中,并将构建的pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5表达质粒转入Hca-P细胞.采用G418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,观察细胞形态变化.蛋白质印迹法分析Anxa5表达情况,CCK-8法检测相应Hca-P细胞的增殖能力.结果:酶切及测序结果显示,pMD(R)18-T-Anxa5克隆质粒和pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5表达质粒构建成功；获得了Anxa5表达稳定上调的单克隆细胞株；与正常Hca-P比较,Anxa5蛋白在pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5-Hca-P单克隆细胞中上调了59.5％,P=0.016；pcDNA3.1-V5/HisB-Anxa5-Hca-P增殖显著加快,P=0.002.结论:成功构建了Anxa5真核表达质粒并获得Anxa5表达稳定上调的小鼠肝癌Hca-P细胞株,Anxa5上调对Hca-P细胞的增殖具有促进作用,为后续研究提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田余祥	大连医科大学生化教研室	49	301	9.0	14.0
2	孙明忠	大连医科大学生物技术系	27	96	6.0	8.0
3	刘淑清	大连医科大学生化教研室	38	105	6.0	8.0
4	唐建武	大连医科大学病理教研室	96	679	14.0	22.0
5	彭博雅	大连医科大学生物技术系	2	3	1.0	1.0
6	李妲	大连医科大学生化教研室	2	3	1.0	1.0