重组人骨硬化蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 刘祥 吴三桥 张晓娟 张涛 牟欢 陈春琳
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨硬化蛋白 多克隆抗体 Western blotting 系统发生分析
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 68-72
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2014.06.0142-5

摘要

[目的]构建人骨硬化蛋白(Sclerostin,SOST)原核载体,表达、纯化SOST蛋白,制备与鉴定小鼠多克隆抗体.[方法]通过分子克隆获得SOST蛋白的表达菌株;利用SDS-PAGE电泳切胶纯化、尿素梯度复性获得SOST蛋白,免疫小鼠制备SOST蛋白多克隆抗体;采用ELISA法检测抗体滴度;Western blotting检测抗血清特异性;DNAMAN与MEGA软件分析SOST蛋白系统进化关系.[结果]SOST重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致.ELISA法获得SOST抗血清滴度达1∶6 400倍,Western blotting证实抗血清具有很好的特异性.SOST序列的系统发生分析发现动物具有显著不同的进化趋势.[结论]成功克隆、表达与纯化SOST蛋白,制备并鉴定小鼠多克隆抗体.为SOST蛋白功能研究奠定基础.