鸡Akt基因mRNA SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 万学瑞 于宏伟 刘磊 刘霞 吴润 张小丽 朱曼玲 贾晓蕊
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡 Akt基因 实时荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 页码范围: 758-764
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

为快速检测鸡细胞的增殖能力,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术,建立鸡Akt基因mRNA的定量分析方法.根据GenBank中原鸡Akt基因和鸡β-actin基因序列,设计合成特异性引物,应用RT-PCR技术从DF-1细胞中扩增出目的基因的DNA片段,并将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒pMD18-Akt和pMD18-β-actin.分别以重组质粒pMD18-Akt和pMD18-β-actin为标准品建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测的标准曲线.结果显示,建立的RT-PCR标准曲线具有良好的线性关系和特异的单个峰,能够对样品进行稳定可靠的定量检测.采用本方法检测DF-1-PrP和DF-1-count细胞系的Akt基因的相对表达量,前者为1.656 9×103,后者为2.257 4×102,DF-1-PrP细胞系的Akt基因表达量明显高于DF-1-cont细胞系(P＜0.01),说明PrPC及Akt在DF-1细胞系中的表达量呈正相关.结果表明,本研究建立的鸡Akt RT-PCR检测方法能够通过对Akt基因的转录量进行检测而评价鸡细胞的增殖能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴润		108	576	13.0	19.0
2	刘磊		49	369	11.0	17.0
3	张小丽		36	74	4.0	7.0
4	刘霞		53	163	8.0	11.0
5	万学瑞		26	90	4.0	9.0
6	朱曼玲		2	0	0.0	0.0
7	于宏伟		3	2	1.0	1.0
8	贾晓蕊		4	2	1.0	1.0