重组人SHH蛋白N端在HEK293T细胞中的分泌表达与鉴定

• 作者: 仇玮祎 常旭 张景海 朱恒奇 林建波 王双 龙凤
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: Sonic Hedgehog蛋白 真核表达 中和抗体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 660-663
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2843字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.05.014

摘要

目的:获得有活性的Sonic Hedgehog(SHH)蛋白N端结构域蛋白纯品,该结构域是SHH蛋白与受体结合结构域,可用作抗原,用于研制抗SHH的中和抗体.方法:应用PCR技术从商业化人Shh基因中分别扩增该基因5'端591和600 bp的片段,并插入真核表达载体pL293,分别在HEK293T细胞中进行瞬时分泌表达,通过His标签纯化后获得SHH-591和SHH-600蛋白纯品,SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行分析,并通过ELISA进行结合活性鉴定.结果:构建了重组表达载体pL293-Shh-N591和pL293-Shh-N600,酶切鉴定和测序证实含有目的基因片段,真核瞬时表达产物均在相对分子质量约20×103处可见与预期相符的条带,该条带可被His标签抗体所识别;纯化获得了SHH-591-His和SHH-600-His蛋白纯品;ELISA结合实验结果显示SHH-591-His和SHH-600-His均能与抗His标签抗体结合,而SHH-591-His与SHH中和抗体的结合能力更强.结论:获得了真核表达的SHH-N蛋白SHH-591-His,可用于下一步中和抗体药物的筛选和后续研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张景海		57	184	7.0	11.0
2	王双	军事医学科学院生物工程研究所	31	134	5.0	11.0
3	林建波	军事医学科学院生物工程研究所	18	66	6.0	7.0
4	朱恒奇	军事医学科学院生物工程研究所	16	50	5.0	6.0
5	仇玮祎	军事医学科学院生物工程研究所	8	28	3.0	5.0
6	龙凤		1	1	1.0	1.0
10	常旭	军事医学科学院生物工程研究所	1	1	1.0	1.0