结核分枝杆菌CFP10、 ESAT6、 Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达

• 作者: 刘晓明 李武 王玉炯 邓光存
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 结核分枝杆菌 优势抗原 共表达 蛋白免疫印迹
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 医学与免疫生物技术
• 页码范围: 265-273
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.130214

摘要

CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原.为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA-CFP 10-ESAT6-Ag85A-Ag85B (pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T细胞对其体外表达进行检测.采用酶切、连接的方法,将CFP10和ESAT6编码基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker连接,插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGH pA之间,使两者融合表达,将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列连接,并赋予RSV启动子和加尾信号BGH pA,使两者在RSV启动子作用下独立表达.重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK 293T细胞中进行体外表达实验,48 h后提取总蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Westernblotting检测.结果显示多基因共表达载体pcDNA-CEAB在真核细胞HEK 293T中得到表达,且CFP 10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别,表明质粒pcDNA-CEAB构建正确,这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玉炯	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	108	671	13.0	20.0
2	邓光存	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	37	252	9.0	14.0
3	李武	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	9	20	2.0	4.0
4	刘晓明	宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室	13	8	2.0	2.0