Collimonas sp.ZL261蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学特性

• 作者: 于莉 刘伟成 卢彩鸽 吴慧玲 张殿朋 李洁琼
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 山冈单胞菌 蛋白酶 基因 克隆与表达
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 1370-1378
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2014.08.1370

摘要

分离自西藏色季拉山海拔4530 m高山草甸土壤的山冈单胞菌(Collimonas sp.)ZL261代谢产物具有很高的蛋白酶活性,为了明确其蛋白酶种类及其作用特点,本文采用限制性内切酶法构建了菌株ZL261的基因组文库,利用透明圈法筛选其胞外蛋白酶活性克隆,对其基因及蛋白结构进行了分析,进一步研究了该酶的表达和酶学特性.结果表明:该蛋白酶基因(命名为capro)包含一个长为1092 bp的完整开放阅读框(GenBank:KF992845),其编码蛋白由363个氨基酸组成;序列比对和同源性分析结果显示,该氨基酸序列与食真菌山冈单胞菌(Collimonas fungivorans)Ter331胞外蛋白酶序列(NC015856)相似性最高,为83％;一级、二级和三级结构分析均显示该蛋白含M35金属蛋白酶家族(EC 3.4.24.20)保守结构域.蛋白酶基因在大肠杆菌DH5α中异源表达获得了约38 kDa的目的蛋白.ZL261粗酶液对金属蛋白酶抑制剂EDTA敏感,最适作用pH值为7,最适温度30℃,在10℃时仍保持70％以上酶活力.综合分析可知,该蛋白酶为中性低温金属蛋白酶.具有较好的开发应用潜能.研究结果为微生物蛋白酶的开发提供了新型种质资源,也为探求不同生境微生物蛋白酶的系统进化关系提供了基础信息.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于莉	广东海洋大学农学院	29	291	9.0	16.0
2	刘伟成	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	78	836	16.0	25.0
3	卢彩鸽	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	33	243	9.0	13.0
4	吴慧玲	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	15	43	5.0	6.0
5	张殿朋	北京市农林科学院植物保护环境保护研究所	21	161	8.0	11.0
6	李洁琼	广东海洋大学农学院	2	7	1.0	2.0