耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

• 作者: NOKUTHULA Peace Mchunu 叶秀云 林碧瑜 牛丹丹 谢爱连
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 地衣芽胞杆菌 耐热嗜碱性蛋白酶 克隆与表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2019,（20）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 101-106
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.2+5
• 字数: 5254字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.20.017

摘要

碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂.为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M20t8539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因aprE539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30％～70％)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小.结果 表明,AprE539的分子量大小为30 kDa.进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最造作用温度为65～70℃;在pH6.0～12.0范围内具有较好的稳定性;在60 ℃保温lh后酶活剩余70％;Cu2、Mn2、Ca2+和Mg2+对酶活有明显促进作用.AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础.