牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 吕闯 朱远茂 王姝 董秀梅 蔡虹 薛飞 马磊
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针 牛副流感病毒3型
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 617-623
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文

摘要

根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测.结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6 copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5％.应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强.用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCIDso的测定结果相符合,但比其更敏感.结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段.