口疮病毒VIR蛋白多克隆抗体的制备及VIR蛋白的亚细胞定位观察

• 作者: 刘永杰 刘湘涛 刘磊 孔汉金 尚佑军 张克山 成伟伟
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口疮病毒 VIR蛋白 抗体 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 页码范围: 1160-1165
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文

摘要

为研究口疮病毒VIR蛋白的生物学特性,构建了含有VIR基因的重组表达质粒pET-VIR和含有绿色荧光蛋白融合真核重组质粒pEGFP-VIR;诱导表达和纯化VIR蛋白,并用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定抗体效价,用Western-blot鉴定抗体的反应原性.利用脂质体介导法将pEGFP-VIR质粒转染绵羊睾丸细胞,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞核染色后激光扫描共聚焦显微镜观察VIR在细胞内的表达和亚细胞定位.结果显示,表达和纯化了含有GST标签的GSTVIR蛋白,主要以可溶性形式存在,其分子质量约27 ku,制备的多克隆抗体效价达1∶218;Western-blot分析结果显示,此多克隆抗体有较好的特异性反应;VIR蛋白主要定位于细胞核内.本试验结果为VIR生物学功能的深入研究奠定了基础.