基于GroEL基因的实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立及评价

• 作者: 吴斌 朱叶飞 李志峰 汤奋扬 祁贤 胡建利 谈忠鸣 顾玲 鲍倡俊
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 恙虫病东方体 荧光定量PCR GroEL蛋白基因 临床标本
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1121-1124
• 页数: 4页
• 分类号: R376
• 字数: 3315字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.11.007

摘要

目的 建立一种敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,用于检测临床标本中的恙虫病东方体.方法 根据恙虫病东方体GroEL蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法.并从灵敏度、特异度、重复性及临床标本的检测能力等方面对本方法进行综合评价.结果 建立的实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性,可检测出恙虫病东方体Gilliam、Karp、Kato和Kawasaki株.建立的标准曲线循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈现良好的线性关系(r=0.99),灵敏度分析显示样品最低检出浓度为21.8拷贝/μL.批内及批间重复性实验变异系数均小于1.5％,显示本方法具有良好的重复性.对本实验室保存的82份临床标本进行检测,并与常规巢式PCR方法比较,本方法检测出26份阳性标本中的25份,检出率为96.15％.结论 本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有较高的敏感性、特异性和稳定性,可用于临床病人及暴发疫情的实验室快速检测.