山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

• 作者: 侯伟杰 安贝 杨雯昱 赵玄多 陈德坤 高洋
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 IFN-γ 基因克隆 原核表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 29-33,34
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4519字
• 语种: 中文

摘要

为获得山羊IFN-γ重组蛋白，提取山羊外周血淋巴细胞总 RNA，反转录得到 cDNA，以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区，构建重组克隆载体。经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列，连入重组表达载体 pET-32a，转入 BL21（Codon Plus）感受态细胞中，测序并分析。重组表达载体经IPTG诱导后，对产物进行SDS-PAGE分析，并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果显示，编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432 bp；SDS-PAGE分析显示，融合蛋白大小约为34．9 ku，在30℃条件下，以0．3 mmol／L的IPTG诱导6 h，可得到大量可溶性表达的目的蛋白；间接 ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈德坤	西北农林科技大学动物医学院	100	613	13.0	20.0
2	赵玄多	西北农林科技大学动物医学院	5	10	2.0	2.0
3	杨雯昱	西北农林科技大学动物医学院	4	8	1.0	2.0
4	高洋	西北农林科技大学动物医学院	15	34	4.0	5.0
5	安贝	西北农林科技大学动物医学院	3	10	2.0	3.0
6	侯伟杰	西北农林科技大学动物医学院	3	7	1.0	2.0