pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体的构建及vigilin重组慢病毒包装

• 作者: 俞小琴 刘秋英 李冉 杨文理 沈文燕 覃扬 魏玲
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: vigilin DsRed2荧光蛋白 重组载体 重组慢病毒
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 142-145
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2
• 字数: 2779字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2014.02.004

摘要

目的 构建pCS-CG-DsRed2-vigilin慢病毒重组载体,以及包装pCS-CG-DsRed2-vigilin重组慢病毒.方法 用NheⅠ、NotⅠ将目的片段红色荧光蛋白基因DsRed2从pDsRed2-N1中切下,连入pcDNA3.1(-)上,再用Kpn1从pcDNA3.1(-)-DsRed2中切下DsRed2片段插入pCS-CG-vigilin中.用相应的内切酶鉴定,阳性克隆送测序鉴定.采用三质粒系统包装慢病毒并分别感染HEK293T和HepG2细胞.结果 电泳显示,构建的pCS-CG-DsRed2-vigilin用KpnⅠ和SacⅡ分别单酶切切下800bp和600bp的插入片段,阳性克隆质粒测序结果与pDsRed2-N1中DsRed2序列一致;HEK293T和HepG2细胞感染后均能观察到较强的红色荧光.结论 带有红色荧光基因的pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体构建成功;成功包装出带红色荧光标签的vigilin重组慢病毒,且该病毒具有较高的感染效率.