通过原位易错PCR一步构建基因突变文库

• 作者: 刘明杰 张永昌 王未未 邵蔚蓝
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 定向进化 随机突变文库 原位易错PCR 环状质粒扩增(PPCP)
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 专论与综述
• 页码范围: 719-724
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130243

摘要

主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术.本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性一退火一延伸一连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP).原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除.筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变.利用这种方法构建了一个木聚糖酶基因和一个纤维素酶基因的随机突变文库,并筛选出具有正向突变的蛋白,证明以PPCP为基础的原位易错PCR技术,为基因定向进化提供了一种快速有效的随机突变文库构建的新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王未未	南京师范大学生命科学学院	4	19	3.0	4.0
2	邵蔚蓝	江苏大学环境学院生物质能源研究所	9	19	2.0	3.0
3	张永昌	南京师范大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0
4	刘明杰	南京师范大学生命科学学院	2	8	2.0	2.0