梅毒螺旋体-15脂蛋白的原核表达及其纯化

• 作者: 何苗 徐敏 杨春晖 边国慧 高瞻
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 梅毒螺旋体-15 脂蛋白 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 800-803
• 分类号: R377+.1|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达梅毒螺旋体-15(Treponema pallidum-15,TP-15)脂蛋白基因,并进行纯化及鉴定.方法 人工合成455 bp的TP-15基因序列,克隆至原核表达载体pETDuet-l,构建原核表达质粒pETDuet-1/TP-15,经双酶切及测序鉴定后,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达;表达产物经Ni2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 重组质粒pETDuet-1/TP-15经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约27 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的2.34％,纯化后蛋白纯度达99％以上,可与HRP标记的梅毒螺旋体多克隆抗体发生特异性结合.结论 构建了原核表达质粒pETDuet-1/TP-15,并于E.coli中成功表达,纯化后获得了高纯度的TP-15蛋白,为进一步研究建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐敏	中国医学科学院输血研究所	16	54	4.0	6.0
2	何苗	中国医学科学院输血研究所	18	47	4.0	5.0
3	杨春晖	中国医学科学院输血研究所	13	54	4.0	7.0
4	边国慧	中国医学科学院输血研究所	10	24	3.0	4.0
5	高瞻	中国医学科学院输血研究所	14	44	4.0	5.0