铜绿假单胞菌外膜蛋白H原核表达、多克隆抗体制备及免疫保护作用

• 作者: 刘祥
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 外膜蛋白H 正交试验 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1092-1096
• 分类号: Q81|R349.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1008.2015.01092

摘要

目的 为铜绿假单胞菌外膜蛋白H(OprH)工业发酵与疫苗开发研究奠定基础.方法 采用分子克隆技术构建OprH蛋白的表达菌株,通过正交试验设计筛选OprH菌株的最佳培养条件与表达条件.利用切胶纯化获得OprH蛋白并免疫小鼠,制备OprH蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度,蛋白质印迹法检测抗血清特异性;对小鼠免疫OprH蛋白,攻毒铜绿假单胞菌,检测蛋白的免疫保护作用.结果 OprH重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致.OprH菌株最佳培养条件为转速230 r/min,葡萄糖浓度0％,装液量50 mL;最佳诱导表达条件为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷终浓度0.3 mmol/L,诱导时菌液D600值0.8,温度32℃,诱导时间3h.ELISA法获得OprH抗血清滴度达1:1 600,蛋白质印迹法证实抗血清具有很好的特异性.OprH免疫小鼠激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到46.15％,与对照相比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建OprH表达载体,纯化获得OprH蛋白,制备OprH蛋白多克隆抗体,实验结果表明OprH蛋白对小鼠铜绿假单胞菌感染具有免疫保护作用,并获得OprH蛋白菌株的最佳培养条件与表达条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘祥	陕西理工学院生物科学与工程学院生物化学与分子生物学教研室	22	92	6.0	8.0