枫香树DNA提取及SRAP-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 李永华 李海波 李芳芳 杨少宗 柳新红 王丽玲
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 枫香树 DNA提取 SRAP-PCR 正交试验设计 反应体系优化
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 林业科学
• 页码范围: 46-51,67
• 页数: 7页
• 分类号: S722.3
• 语种: 中文

摘要

通过不同处理的枫香树叶片及基因组DNA提取方法的对比,并采用L16(4 5)正交试验设计,对影响SRAP-PCR反应体系的Mg2,dNTPs,引物浓度及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量等5个因素进行优化,确立枫香树SRAP-PCR最佳反应体系.结果表明,改良CTAB法提取枫香树基因组DNA的产率和纯度均可满足下游试验需要.SRAP-PCR最优反应体系为:总体积20 μL,合1×PCR Buffer,1.5 mmol·L-1 Mg2+,0.16mmol·L-1 dNTPs,0.5 μmol· L-1引物,0.9 UTaqDNA聚合酶和40 ng模板DNA.各因素对反应结果的影响大小顺序为Taq DNA聚合酶量＞dNTPs浓度＞Mg2+浓度＞模板DNA用量＞引物浓度.运用优化的SRAP-PCR反应体系对10个不同居群的枫香树基因组DNA扩增检测,结果均能获得稳定性高、多态性丰富和重复性好的条带图谱.