合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化

• 作者: 喻达辉 朱文杰 毕晓敏 范嗣刚 黄桂菊
• 来源期刊: 南方水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 合浦珠母贝 Pearlin 原核表达 表达条件优化 包涵体
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 100-106
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 5421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.014

摘要

为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的cDNA,将其ORF克隆至原核表达载体pET32a构建得到重组质粒pET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(E.coli) BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白pET32a-Pearlin约为34.19 kD.对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化.结果显示,IPTG浓度在0.6～1.4 mmol·L-1范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmol·L-1、相同培养时间(6 h)下,37℃表达蛋白最多;重组蛋白在pH分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4～6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3～4h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想.对重组融合蛋白pET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融合蛋白都主要以包涵体形式存在.