Ag43／GFP 嵌合表达质粒的构建及其在大肠杆菌表面的表达

• 作者: 周松林 林映莹 谭光宏 赵焕阁 黄用豪 黄风迎
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 抗原Ag43 绿色荧光蛋白 嵌合重组蛋白质 重组表达质粒 细菌表面表达
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 517-520,521
• 页数: 5页
• 字数: 4887字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建大肠杆菌抗原Ag43（pETAg43′）以及Ag43和绿色荧光蛋白（GFP）（pETAg43′／GFP）的重组表达质粒，了解pETAg43′／GFP是否能够将GFP表达于细菌表面。方法用PCR扩增获得Ag43大部分基因序列（ Ag43′），同时用酶切方法从质粒pEGFP－C1切取GFP基因序列，首先将Ag43′基因序列插入表达质粒pET－22b中，获得重组质粒pETAg43′，然后再将GFP基因序列插入pETAg43′获得质粒pETAg43′／GFP。将重组质粒pETAg43′／GFP转化Ag43基因缺失的菌株JM109（△Ag43），用荧光显微镜和SDS－PAGE了解是否能将GFP表达于细菌表面，同时了解加热是否能够直接获得Ag43′／GFP的嵌合重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的Ag43′和GFP基因序列分子量大小与预期值相一致，酶切分析重组质粒pETAg43′和pETAg43′／GFP结果与预期值相符，基因测序显示质粒pETAg43′和pETAg43′／GFP的基因序列和阅读框架均准确无误。质粒pETAg43′／GFP经诱导后可以将Ag43′／GFP嵌合蛋白表达于大肠杆菌JM109（△Ag43）的表面，55℃加热50 min是提取Ag43′／GFP嵌合蛋白的最佳条件。结论成功构建了能够将外源蛋白GFP表达于细菌表面的重组表达载体，在大肠杆菌表面有效表达并加热提取获得了嵌合重组蛋白Ag43′／GFP，为制备其他自身抗原分子的Ag43嵌合蛋白奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭光宏	海南医学院海南省热带病重点实验室	43	127	8.0	9.0
2	黄风迎	海南医学院海南省热带病重点实验室	26	48	4.0	5.0
3	赵焕阁	海南医学院海南省热带病重点实验室	17	38	3.0	5.0
4	林映莹	海南医学院海南省热带病重点实验室	17	38	3.0	5.0
5	周松林	海南医学院海南省热带病重点实验室	20	61	4.0	7.0
6	黄用豪	海南医学院海南省热带病重点实验室	25	52	3.0	6.0