构建原核表达质粒pGEX-4T-2-GFP并鉴定其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 周晨辰 张硌 张鹏飞 陆琤
• 来源期刊: 中国医学装备
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 pGEX-4T-2载体 重组质粒 表达 荧光显微镜
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 学术论著 -- 「实验科学」
• 页码范围: 120-122
• 页数: 3页
• 分类号: R197.324
• 字数: 2033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.08.038

摘要

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)的原核表达质粒，用以研究小鼠巨噬细胞吞噬细菌的能力。方法：编码GFP的聚合酶链反应(PCR)产物经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后，与双酶切后的载体pGEX-4T-2相连，将pGEX-4T-2-GFP转化E.coli DH5α提取质粒，经测序后转化E.coli BL21中诱导GST-GFP融合蛋白表达，将表达融合蛋白的大肠杆菌滴入培养巨噬细胞的皿中，于荧光显微镜下观察GFP的表达及大肠杆菌被吞噬情况。结果：获得的重组质粒测序正确。荧光显微镜下能清晰观察到培养基中及被巨噬细胞吞噬后发绿色荧光的大肠杆菌。结论：成功构建了pGEX-4T-2-GFP重组质粒，为研究小鼠巨噬细胞吞噬细菌的能力创造条件。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆琤	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0
2	周晨辰	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0
3	张鹏飞	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0
4	张硌	军事医学科学院附属医院医学工程科	3	2	1.0	1.0