大肠杆菌γ-ggt原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt的构建及其蛋白表达

• 作者: 单建华 殷志敏 胥俊峰 赵宁伟
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: γ-谷氨酰转肽酶 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2007,（30）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 9467-9469
• 页数: 3页
• 分类号: Q936
• 字数: 3473字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2007.30.005

摘要

构建大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt及表达与鉴定目的蛋白,为进一步利用该酶催化合成茶氨酸等目的产物奠定了基础.以大肠杆菌DH5α总DNA为模板,用PCR法在γ-ggt编码序列上下游引入酶切位点并扩增出γ-谷氨酰转肽酶基因;将γ-ggt编码序列克隆入原核表达载体pGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR鉴定重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt,并对插入基因片断测序;重组质粒pGEX-4T-1/γ-ggt转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导后用SDS-PAGE分析表达产物,并经Western blot鉴定.获得大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶基因,并成功构建到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化有pGEX-4T-1/γ-ggt工程菌BL21(DE3)经1 g/L乳糖诱导1 h后即开始表达目的蛋白,在诱导6 h后表达蛋白量达到最高,随着时间的延长,目的蛋白没有被降解,此蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot鉴定了此目的蛋白.成功构建了大肠杆菌γ-谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX-4T-1/γ-ggt,并进行了目的蛋白的鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	殷志敏	南京师范大学生命科学学院	27	181	7.0	12.0
2	赵宁伟	南京师范大学生命科学学院	3	37	3.0	3.0
3	胥俊峰	南京师范大学生命科学学院	3	19	3.0	3.0
4	单建华	南京师范大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0