pGEX-4T-1-cMC4R原核表达载体的构建与表达

• 作者: 巴彩凤 聂茹
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 犬 MC4R LP Recto PcR克隆技术 重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R 诱导表达
• 年，卷（期）: 2008,（23）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 9921-9924
• 页数: 4页
• 分类号: S829.2
• 字数: 3817字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.23.046

摘要

[目的]构建犬MCAR基因编码区的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白.[方法]以Beagle犬基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的片段,利用LP Recco PCR克隆技术将目的片段直接重组到原核表达栽体pGEX-4T-1上,转化到E.coli DH5α,筛选阳性克隆,BamHI、XhoI酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMCAR转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测犬MCAR蛋白的表达.[结果]成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R,经DNA测序证实插入序列与设计基本一致,只有777位碱基T变成了C,这是由于犬MCAR编码区存在的多态性引起,对表达的犬MG4R蛋白序列无影响.大肠杆菌诱导后表达出犬MCAR融合性蛋白.[结论]成功构建犬MCAR原核表达栽体,此重组体能在E.coli BL21内表达犬MCAR融合蛋白,为进一步获取犬MCAR的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究犬MCAR蛋白的结构和生理功能提供帮助.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巴彩凤	辽宁医学院实验动物中心	91	369	10.0	14.0
2	聂茹	辽宁医学院实验动物中心	6	78	5.0	6.0