转录因子KLF6对大鼠趋化因子CCL5基因启动子活性的影响及其可能的结合部位

• 作者: 何风霞 刘玉 卢燕来 周梦雅 张婧 王璐璐 虞天一 赵聃 邱文
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Kruppel样转录因子6 CCL5 肾小球系膜细胞 荧光素酶报告质粒 启动子活性
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 461-465
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 字数: 3863字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y150189

摘要

目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响.同时,筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点.方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列(-1744nt ～-14nt)插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,获得CCL5基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-CCL5-FL).然后,将pGL3-CCL5-FL与大鼠野生型KLF6表达质粒(pIRES2/KLF6)共转染GMC,测定其荧光素酶活性.另用生物信息学软件预测CCL5基因启动子上KLF6潜在的结合位点,并据此构建出4个CCL5基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-CCL5-1～4).将上述CCL5基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒分别与KLF6过表达质粒共转染GMC,再行荧光素酶活性的测定,初筛KLF6可能的结合部位.结果:菌液PCR以及核酸测序结果证实,上述所有启动子荧光素酶报告质粒均构建成功.pGL3-CCL5-FL和pIRES2/KLF6共转染GMC结果显示,CCL5基因启动子的活性显著增强.pGL3-CCL5-FL、pGL3-CCL5-1～4分别与pIRES2/KLF6共转染GMC后发现,pGL3-CCL5-4的启动活性显著降低.提示KLF6可能结合在CCL5基因启动子的-343nt ～-191nt区域.结论:本实验成功构建了大鼠CCL5基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出KLF6在CCL5基因启动子上可能的结合部位在-343nt ～-191nt区域.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张婧	南京医科大学免疫学系	31	135	8.0	10.0
2	刘玉	南京医科大学免疫学系	20	89	5.0	9.0
3	赵聃	南京医科大学免疫学系	21	11	2.0	3.0
4	何风霞	南京医科大学免疫学系	6	0	0.0	0.0
5	卢燕来	南京医科大学免疫学系	8	4	1.0	1.0
6	王璐璐	南京医科大学免疫学系	7	0	0.0	0.0
7	虞天一	南京医科大学免疫学系	3	0	0.0	0.0
8	周梦雅	南京医科大学免疫学系	2	0	0.0	0.0