Cbl-b基因shRNA干扰载体的构建及鉴定

• 作者: 倪娜娜 刘毅 吕雅琳 孙建方 胡彬 陈浩
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 泛素蛋白连接酶类 RNA,小分子干扰 黑色素瘤 基因,Cbl-b
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报道
• 页码范围: 204-207
• 页数: 4页
• 字数: 3583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.03.018

摘要

目的 构建小鼠Cbl-b基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒,并初步鉴定其干扰效果,为后续研究Cbl-b在黑素瘤免疫治疗中的作用奠定基础.方法 根据基因库提供的Cbl-b cDNA序列,设计并合成4对短发夹结构的互补DNA序列,克隆至载体PGPU6/GFP/Neo构建重组质粒,并予以DNA测序鉴定.重组干扰质粒构建成功后,将干扰质粒与Cbl-b过表达载体共转染293T细胞,于转染后48 h,通过实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测各质粒对Cbl-b基因的表达抑制效应.结果 测序分析证实,4对shRNA寡核苷酸序列分别成功插入至shRNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo中,将构建成功的PGPU6/GFP/Neo-shRNA质粒与Cbl-b真核表达载体共转染细胞48 h后,通过荧光实时定量PCR法及Western印迹测定,发现4条shRNA序列对Cbl-b的表达均有一定的抑制效应,其中以1号shRNA序列重组质粒对Cbl-b表达的抑制程度最高(P＜0.05).结论 成功构建并筛选出沉默效应最高的Cbl-b shRNA真核细胞表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈浩	中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所	125	221	7.0	9.0
2	孙建方	中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所	247	484	9.0	13.0
3	刘毅	中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所	49	192	8.0	12.0
4	胡彬	中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所	14	8	2.0	2.0
5	吕雅琳	中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所	8	8	2.0	2.0
6	倪娜娜	中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所	4	4	1.0	1.0