新疆出血热病毒截短糖蛋白的原核表达及抗体制备

• 作者: 俞欢 孙素荣 寇春 张渝疆 彭倩 托肯 李轶杰 李阳 汪梅芳 达尔肯·
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 新疆出血热病毒 糖蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 348-352
• 页数: 5页
• 字数: 4743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.05.005

摘要

目的：原核表达纯化新疆出血热病毒79121毒株糖蛋白截短片段（ Gn、Gc1和Gc2）并分别制备其多克隆抗体。方法采用反转录PCR的方法克隆79121毒株Gn、Gc1及Gc2基因片段，并将其构建到原核表达载体pET-28a（＋）中，转化到E．coli BL21（DE3）中进行诱导表达，经镍柱亲和层析法纯化Gn-His、Gc1-His及Gc2-His融合蛋白，SDS-PAGE分析蛋白相对分子质量（ Mr ）。用纯化蛋白免疫新西兰白兔制备抗血清，ELISA和Western blot法检测血清效价和特异性。结果双酶切鉴定和测序证实构建的pET-28a-Gn、pET-28a-Gc1和pET-28a-Gc2重组表达载体正确，表达的融合蛋白Gn-His、Gc1-His和Gc2-His其Mr 分别约为25×103、33×103和34×103。 ELISA法检测抗体效价分别为1∶25600、1∶6400及1∶25600。 Western blot结果表明兔多克隆抗体均能特异性识别相应的重组蛋白。结论新疆出血热病毒截短糖蛋白的表达纯化和效价高、特异性好的兔抗血清的制备，为新疆出血热病毒的检测和糖蛋白生物学功能的深入研究提供资料。