问号钩端螺旋体 tlyA 基因原核表达及其表达产物溶血和致炎作用

• 作者: 严杰 周永列 林旭瑷 王欢 邱莲女
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 问号钩端螺旋体 tlyA基因 溶血素 表达/分泌 致炎细胞因子
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 341-347
• 页数: 7页
• 字数: 5287字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.05.004

摘要

目的：构建问号钩端螺旋体（简称钩体） tlyA基因原核表达系统，确定目的重组表达产物rTlyA溶解红细胞及诱导人THP-1和小鼠J774A．1巨噬细胞分泌致炎细胞因子的作用。方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株tlyA基因，T-A克隆后测序。采用原核表达载体pET-42a及表达宿主菌E．coli BL21DE3构建tlyA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测rTlyA表达情况， Ni-NTA亲和层析法提纯rTlyA。采用平板法和分光光度法测定rTlyA对绵羊红细胞的溶血活性。采用RT-PCR和Western blot分别检测问号钩体赖株感染THP-1和J774A．1细胞后tlyA基因mRNA水平变化及TlyA外分泌情况。采用ELISA检测rTlyA诱导THP-1和J774A．1细胞分泌致炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的作用。结果所克隆的tlyA基因与GenBank中公布的相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．2％和99．8％。所构建的tlyA基因原核表达系统能有效表达rTlyA。10μg／ml rTlyA能显示较强的溶解绵羊红细胞活性。问号钩体赖株感染THP-1和J774A．1细胞1～8 h后，tlyA-mRNA水平显著升高（P＜0．05）且出现TlyA外分泌。0．1、1和10μg／ml rTlyA均能使THP-1和J774A．1细胞分泌致炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平显著升高（P＜0．05）。结论问号钩体tlyA基因产物TlyA是溶血素并能诱导巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α，可在钩体病炎症反应中发挥重要作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周永列	浙江省人民医院检验中心	159	768	12.0	20.0
2	邱莲女	浙江省人民医院检验中心	84	386	9.0	16.0
3	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
4	林旭瑷	浙江大学医学院病原生物学系	28	47	4.0	5.0
5	王欢	浙江省人民医院检验中心	16	34	4.0	5.0